HAT选择培养基对杂交瘤细胞的筛选原理

小鼠B淋巴细胞与骨髓瘤细胞融合的过程中，有5种细胞存在（未融合的B淋巴细胞、未融合的骨髓瘤细胞、B淋巴细胞与B淋巴细胞融合的细胞、骨髓瘤细胞与骨髓瘤细胞融合的细胞、杂交瘤细胞）。正常的B淋巴细胞在培养基中仅能存活5～7天，无需特别筛选，细胞的多聚体形式也容易死去；未融合的骨髓瘤细胞则需要筛选去除。

正常细胞的核苷酸合成有两个途径：全合成途径和补救合成途径。全合成途径是由糖和氨基酸合成核苷酸，进而合成DNA，该过程会被氨基蝶呤（aminopterin，A）阻断。补救合成途径是在次黄嘌呤（hypoxanthine，H）和胸腺嘧啶核苷（thymidine，T）存在的情况下，经过转移酶和激酶的催化合成核苷酸，进而合成DNA。所用的骨髓瘤细胞缺乏转移酶而不能通过补救合成途径合成DNA。

HAT培养基因添加H、A、T而得名。在HAT培养基上，A（氨基蝶呤）会阻断核苷酸的全合成途径，骨髓瘤就不能合成核苷酸进而合成DNA，不能增殖而被淘汰掉。杂交瘤细胞具有B淋巴细胞的遗传特性，还可以通过补救途径合成核苷酸，进而合成DNA，能在HAT培养基中长期存活与繁殖。